不同制法马钱子抗炎镇痛作用讨论论文
炎症是机体对炎症因子的损伤产生的一种以血管渗透为中心的积极防御反应，是机体对损伤性刺激的保护性反应，该过程会产生如组胺、前列腺素等致痛物质，加重机体的疼痛与损伤。多年研究早已证实中药制剂具有很好的抗炎镇痛作用，且毒副作用小。马红丸是广州市中医医院自上世纪70年代初就应用于治疗肝癌的特色中药制剂。前期课题组采用反相高效液相色谱法测定了马红丸君药马钱子活性成分马钱子碱的含量，并对马钱子碱脂质体不同给药方式进行了药动学考察。本实验采用小鼠耳廓肿胀法、醋酸扭体法与小鼠热水甩尾法对不同制法马钱子的抗炎镇痛作用进行比较，为马钱子的减毒增效炮制工艺优化提供理论依据。
1 材料
1. 1 药材
生马钱子购于广州采芝林药业有限公司，批号: YPA0J0001，经广东省生物制品与药物研究所钟世顺副主任药师鉴定为马钱科植物马钱Strychnos nux-vomica L. 的干燥成熟种子。1. 2 动物
SPF 级健康昆明小鼠264 只，雌雄各半，体重18 ～ 22 g，由广东省医学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号: SCXK( 粤) 2009-0002。
1. 3 试剂
阿司匹林肠溶片，河南天地药业股份有限公司，批号: 140405; 乙醚和二甲苯，天津市富宇精细化工有限公司，批号分别为20131205 和20140210; 醋酸，天津市大茂化学试剂厂，批号:20140520; 食用油、白醋，广州顶益食品有限责任公司; 粗河沙适量。
1. 4 仪器
AEL-160 型电子分析天平( 日本岛津公司) ; 恒温水浴锅( 上海齐欣科学仪器有限公司) 。
2 方法
2. 1 实验用药的制备
2. 1. 1 马钱子药材的净制:
将马钱子置于草木灰的余火中不停翻动，烤至表面鼓起，取出，刮去茸毛，得马钱子生品。
2. 1. 2 油马钱子的制备:
市售麻油倒入铁锅中用温程400 ℃温度计距锅底3 mm 处测温，待温度至235 ℃时投入生马钱子，炸至老黄色为度，取出沥尽油，晾冷。
2. 1. 3 砂马钱子的制备:
取洁净粗河沙加入锅内加热，用温程300 ℃温度计距锅底3 mm 测温，待温度至230 ℃时投入生马钱子，掩埋30 s，不断翻动3min，至鼓起爆裂并显棕褐色或深棕色时迅速出锅，晾凉。
2. 1. 4 醋马钱子的制备:
取生马钱子水浸2 d，润12 h，作切片前的软化处理，切成1. 5 mm 厚的薄片。每100 g 马钱子加入20 mL 醋拌匀，待醋吸净后即炒干，取出晾凉。
2. 1. 5 马钱子水煎液的制备:
称取马钱子油炙品、砂制品和醋制品粗颗粒各50 g，分别用蒸馏水浸泡30 min，煎煮至沸后用文火煮30 min，搅拌，滤出煎液，药渣再用适量蒸馏水煎煮20 min，滤出煎液，合并滤液，浓缩至生药含量高剂量20 mg /kg，中剂量10 mg /kg，低剂量5 mg /kg。
2. 2 实验方法
2. 2. 1 耳廓肿胀法:
取小鼠88 只，雌雄各半，随机分为模型组( 生理盐水组) ，阿司匹林组( 20 mg /kg) ，油马钱子高、中、低剂量组，砂马钱子高、中、低剂量组，醋马钱子高、中、低剂量组，每组8 只，分别灌胃给药，连续给药2 w。于末次给药后1 h，用乙醚轻度麻醉，在小鼠右耳两侧涂20 μL 二甲苯致炎，左耳不作任何处理，3h 后将小鼠脱颈椎处死，剪下两耳，用直径7 mm 的打孔器在对应位置冲下左右耳廓，分别在电子天平称重，计算肿胀度。肿胀度= 致炎耳片重- 非致炎耳片重。
2. 2. 2 扭体法:
取小鼠88 只，分组及给药同“2. 2. 1”项下，各组小鼠在末次给药后30 min 腹腔注射0. 5%的'醋酸溶液20 mL /kg，观察并记录注射醋酸溶液后15 min 内出现扭体反应次数，实验完毕后，计算药物镇痛百分率。镇痛率=对照组扭体次数- 给药组扭体次数对照组扭体次数× 100%。
2. 2. 3 甩尾法: 取小鼠88 只，按“2. 2. 1”项下方法分组。小鼠禁食不禁水12 h，将小鼠尾端0. 5 cm 浸入57 ℃恒温水浴锅中，记录鼠尾进入水面到回缩出水面的时间为甩尾潜伏期。各组小鼠用药前测痛2次，每次间隔10 min，取平均值作为基础痛阈值( 剔除小于1 s 及大于6 s 的个体) 。24 h 后取合格小鼠测定基础潜伏期，然后按“2. 2. 1”项下方法分别灌胃给药，测定并记录各给药组末次给药后30、60、90、120 min 小鼠甩尾潜伏期变化。
2. 3 数据处理
用SPSS 17. 0 软件进行统计分析，组间数据比较采用单因素方差分析( One-way ANOVA)，以P < 0. 05 表示差异有统计学意义，所得数据以珋x ± s 表示。
3 结果
3. 1 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
除油马钱子和砂马钱子低剂量组外，其余各组给药2 w 后对二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀均有不同程度的抑制作用，其中醋马钱子中、高剂量作用最强。
3. 2 对醋酸腹腔刺激致小鼠扭体的影响
各组均对醋酸腹腔刺激所致的疼痛有显著的抑制作用，尤以醋马钱子高剂量组的镇痛作用最强，镇痛率为46. 2%。
3. 3 对小鼠热水甩尾潜伏期的影响除油马钱子低剂量组外，各组多能显著延长小鼠甩尾潜伏期。与模型组比较，除油马钱子及砂马钱子低剂量组外，其余各组马钱子制品不同剂量组在30 min 后均能延长小鼠甩尾潜伏期，而醋制马钱子对其影响最大。
4 讨论
马钱子因大毒、安全范围小，限制了临床应用，其中马钱子碱和番木鳖碱可作用于脊髓，兴奋脊髓的反射功能，引起感觉器官敏感，调节大脑皮层兴奋和抑制过程，提高横纹肌、平滑肌和心肌的张力，导致强直性惊厥，最后因呼吸麻痹而致死。适当的炮制方式可迅速破坏马钱子相关有毒物质结构，使其转化成药理作用相似但毒性降低的氮氧化物和异型生物碱。而含毒性马钱子的中成药制剂数量较少，且多为炮制后入丸散用。
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